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生物学论文_PEDV结构蛋白S和M在昆虫细胞中的表
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摘要：文章摘要:为在昆虫细胞中表达猪流行性腹泻病毒（PEDV）的S和M蛋白，并探讨S和M蛋白能否自动组装成病毒样颗粒（VLPs）分泌至培养基中，本研究构建了3种不同的重组质粒（pFastBac-S、
文章摘要:为在昆虫细胞中表达猪流行性腹泻病毒（PEDV）的S和M蛋白，并探讨S和M蛋白能否自动组装成病毒样颗粒（VLPs）分泌至培养基中，本研究构建了3种不同的重组质粒（pFastBac-S、pFastBac-M和pFastBac-S-M），转化入DH10Bac感受态细胞，经蓝白斑筛选及PCR鉴定获得重组Bacmid，通过转染昆虫细胞Sf9获得重组杆状病毒（BV-S、BV-M 和BV-S-M）。在悬浮培养的昆虫细胞Sf9中进行表达，表达分泌的上清通过蔗糖梯度离心进行浓缩纯化，最终获得分泌型的S-M VLPs。通过Western-blotting分析S和M蛋白的表达和分泌特性，透射电镜观察VLPs形态，间接ELISA检测VLPs与猪PEDV阳性血清的反应性，最后免疫小鼠后检验其免疫原性。结果显示，S和M蛋白均能以单独或共表达的形式（S-M）分泌至培养基中。电镜下可观察到由S-M蛋白形成的直径约为90～190 nm的VLPs。间接ELISA结果显示，S、M和S-M蛋白可与PEDV猪阳性血清发生特异性反应，免疫小鼠3次后可产生高水平特异性IgG抗体。以上结果表明，在Sf9昆虫细胞中共表达S和M蛋白可以获得分泌型S-M VLPs，并具有良好的免疫原性。
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项目基金:《昆虫学报》 网址: http://www.kcxbzz.cn/qikandaodu/2021/1025/1021.html